两湖书院蜚声海内，张为办好这所书院，投入大量财力，延聘名师执教。著名学者有：
蒯光典，安徽合肥人，官候补道，为李鸿章的侄婿。他是一位翰林，曾因案发被押解回籍。由于他为学笃实，主张经世致用，对西学颇有研究，故张之洞于1895年请他到两湖书院任教。1896年，两湖书院设东西监督扣，梁鼎芬为东监督，讲中学；蒯光典为西监督，讲西学。由于中、西监督学术观点不同，性格气质各异，常常引发冲突。1898年蒯光典离开武汉。越两年，梁鼎芬出任武昌知府。不久，以武昌府任兼署盐法武昌道。在武昌府、道任上，梁还兼学务处提调，管理湖北学务。他不仅创办了府道两级师范学堂，而且还捐俸1万元开办省师范学堂。
梁鼎芬离开两湖书院后，由王同愈接任书院监督之职。王同愈、苏州人，亦翰林出身，精于教学，曾任湖北学政，对新教育有所了解。但他任职不及1年即离去，其职由黄绍箕接任。
黄绍箕（1854—1907），浙江瑞安人，1880年，中进士。幼年习汉宋之学，后受张之洞影响，研究经济之学。曾参与编辑《大清汇典》（1896年），并曾典试湖北（1897年），后被延为京师大学堂总办（1898年），但未就职。他于1900年底接替王同愈，担任两湖书院监督，迄1904年离职，担任湖北提学使司提学使。黄氏在湖北的数年中，正值张之洞推进湖北教育改革的关键期，他对两湖书院及其他学堂的设立，留学生的遗派，均有积极的表现。张之洞对他甚为赞赏，谓其“品端学博，沉细不浮，于中西政治纲领，学校规制，实能精思博考……洵为今日切于世用之才。”有人说《劝学篇》一书，实际出于黄绍箕和辜鸿铭之手。应该说，他是湖北新教育的主要策划人之一。
这一时期两湖书院共聘雇了16位教习，具体分配如下：经学3人、史学2人、地理2人、兵法史略学1人、算学3人、博物1人、化学1人、天文1人、测量2人，合计16人。这些教习，有的是旧学的饱学之士，有的则是新学的敏锐探求者，不仅学业有专攻，而且富有教学及实际工作经验。
史学教习姚晋圻（1857—1915），清末民初教育家，字彦长，自署东安生。湖北罗田人。光绪十八年进士，授翰林院编修、刑部主事。曾三脚架康有为领导的戊戌变法，事败后返鄂，历任两湖书院史学分教，黄州经古书院院长，勤成学校监督，湖北学务外议长、湖北教育会会长，法政学堂监督、存古学堂教务长兼史学总教、湖北通志总纂、礼学馆顾问等。1912年，任湖北省教育司司长。“以读书为乐、研精史部，识解甚高，治乱兴衰能知其数”。主张改革教育，选拔优秀学生出国深造。
另一史教习沈曾植，浙江嘉兴人。进士。1898年5月接替姚晋圻任史学教习。沈氏著述极丰，对西北边疆与南洋地理有独到研习。
冶金专家李维格亦出任两湖书院总教习，后又充汉阳铁厂总办。
地理教习邹代钧，湖南新化人，出身舆地世家，1885年曾随刘瑞芬出使英、俄、悉心考察欧洲地理，回国后曾任湖北舆图总局总纂，主持测验湖北全省地图，并执教过京师大学堂，张之洞称赞他“于中外舆地之学考求精熟，绘有全图当世实罕其匹”。另一地学教习杨守敬，湖北宜都人，光绪中叶曾两度随驻外使节东渡日本，张之洞称赞他“博览群书，致力舆地学数十年，于列朝沿革险要洽熟精祥，著书满家”。《清史稿》誉其为“鄂学灵光”。
华蘅芳（1833—1902），江苏无锡人，精于数学，且善于应用所学，曾帮助曾国藩建造轮船，于轮船之制图与动力设计均有贡献，后在江南制造局附近设之翻译馆任事，担任算学、地质两门翻译，译有《代数学》等，算学是两湖书院重点学习的科目，聘有3名算学教习，均为当时全国有名的数学家，尤以华蘅芳为著，他居上海40年，精心译述，成书12种，是当时国内首屈一指的数学家，1892—1894年间，曾莅鄂任教于两湖书院和自强学堂。张之洞决定对两湖书院改章时，曾于1897年2月致电华蘅芳，华居武昌达10年之久，被鄂人奉为泰斗。其它任算学教习，一为汤金铸，广东花县人，曾任福州船政学堂教习，是中国早期海军科学人才之一；一为曹汝英，“精通西算，启诱有力，所撰算学教科书为学堂中最善之本”。
当时，张之洞广延国之精英充实幕府，人才称盛。如河间纪香聪、罗田王葆心、武进恽元复（先烈恽代英之祖父）、长沙张世准（叔平）、杨寿昌、易顺鼎、梁敦彦等等，均罗致在帐下或工厂、书院中，以兴洋务。
两湖书院改章后，聘进了一批见闻广博、学有专长的近代型师资，这些教习受到很高的礼遇。分教每朋薪银100两（当时米价最高时一石值银2至3两），另配房屋一栋；每逢书院开学时，湖广总督张之洞必率文武百官到院参加开学仪式，先率师生向孔子神位行三跪九叩礼，后率百官向监督及教习行叩首礼。
两湖书院自成立至1902年止的12年中，共3届，造就了大批人才。据光绪34年（1908年）迄宣统二年（1910年）间湖广总督咨报学部的“湖北各项实业学堂一览表”及其他有关资料，查出两湖书院肄业生共64人。现以此64人为代表来观察他们成就的大概情形。64人中后后留学的有30人，占总数的47%。其中留日的24人，留美的2人，留欧的4人。他们留学时学教育的7人，学军事、警察的7人，学工业的2人，学法商的9人，其余5人不知所学。在这64人中，后来服务教育界的47人，参加革命的14人（詹才学、黄兴），从政者3人。而在教育界任职的47人中，担任学堂监督与堂长的12人，教文史的11人，教数理化的10人，教农学工学的3人，其他11人。
